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枯草芽孢杆菌的高密度发酵及喷雾干燥方法

浏览次数:6342022/01/14  

1. 一种枯草芽孢杆菌的高密度发酵及喷雾干燥方法,其特征在于,包括如下步骤: (a) 、菌种活化:将在4°C温度下斜面保存的枯草芽孢杆菌划线于NA培养基上,于30〜37 °C培养20〜30h; (b) 、种子液制备:挑取活化的菌落,接种到灭菌后的肉汤培养基中,于30〜37°C、150〜 220rpm恒温振荡摇床培养20〜30h,制成种子液; (c) 、发酵罐培养:将制备好的枯草芽孢杆菌种子液以1〜10%的接种比例移入装有发 酵培养基的发酵罐中;发酵过程中采用补料分批发酵控制方法:在发酵第6h前流加葡萄糖 液维持5〜10g/L残糖浓度;同时补加酸性pH调节剂或碱性pH调节剂使发酵液pH维持在6.5 〜8.0范围;其它发酵条件为:通气量1〜3: 1VVM,温度30〜37°C,搅拌转速200〜600rpm,罐 压0.03〜0.07MPa,发酵时间20〜30h;得到高密度发酵菌液; (d) 、喷雾干燥:在高密度发酵菌液中加入2〜10%w/v的保护剂,搅拌均匀后进行干燥; 喷雾干燥条件为:进风口温度150〜180°C,出风口温度70〜90°C,进料速度1〜3L/h;收集得 到枯草芽孢杆菌干粉制剂。

2. 根据权利要求1所述的一种枯草芽孢杆菌的高密度发酵及喷雾干燥方法,其特征在 于,步骤(c)中,自初始状态到发酵罐内活菌数达到稳定状态的发酵阶段,发酵罐内的温度 控制在34〜37°C;发酵罐内的活菌数达到稳定状态至放罐阶段,发酵罐内的温度控制在30 °C〜34°C。

3. 根据权利要求1所述的一种枯草芽孢杆菌的高密度发酵及喷雾干燥方法,其特征在 于,步骤(d)中,所述保护剂选自玉米淀粉、蔗糖、糊精、乳糖、碳酸钙、磷酸氢钙、硫酸钙、微 晶纤维素、聚天冬氨酸、脱脂乳粉、海藻糖中的至少一种。

4. 根据权利要求3所述的一种枯草芽孢杆菌的高密度发酵及喷雾干燥方法,其特征在 于,步骤(d)中,发酵菌液中加入的所述保护剂为1.8%碳酸钙、3.2%微晶纤维素、2%聚天 冬氨酸。

5. 根据权利要求1到4任一项所述的一种枯草芽孢杆菌的高密度发酵及喷雾干燥方法, 其特征在于,步骤(c)中所述发酵培养基的组分为:玉米淀粉5〜15g/L,蛋白胨1〜5g/L,酵 母粉1〜58/1,似0:15〜1(^/1,消泡剂1〜58/1,余量为水;所述发酵培养基的消后?11为6.5 〜7 • 5。

6. 根据权利要求5所述的一种枯草芽孢杆菌的高密度发酵及喷雾干燥方法,其特征在 于,所述消泡剂为聚醚类、有机硅类、聚醚改性硅类中的至少一种。

7. 根据权利要求1到4任一项所述的一种枯草芽孢杆菌的高密度发酵及喷雾干燥方法, 其特征在于,步骤⑹中,所述酸性pH调节剂选自于浓度为5〜10wt %的稀盐酸或稀硫酸或 稀磷酸,碱性pH调节剂选自于浓度为5〜l〇wt %的氨水或10〜20wt %氢氧化钠。

8. 根据权利要求1到4任一项所述的一种枯草芽孢杆菌的高密度发酵及喷雾干燥方法, 其特征在于,步骤(c)中,得到的发酵菌液的枯草芽孢杆菌活菌数浓度多150亿cfu/mL,芽孢 转化率多97 %。

9. 根据权利要求1到4任一项所述的一种枯草芽孢杆菌的高密度发酵及喷雾干燥方法, 其特征在于,喷雾千燥制得的枯草芽孢杆菌干粉制剂的枯草芽孢杆菌活菌数浓度多1000亿 cfu/g,菌种存活率高于85%。


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